Spatiotemporal expression pattern of alpha, beta, and gamma genes during BoHV-5 infection / Expressão temporal de genes alfa, beta e gama durante ainfecção pelo BoHV-5

Bovine herpesvirus 5 is an alphaherpesvirus that causes nonsuppurative meningoencephalitis in cattle. This disease occurs naturally in either outbreaks or isolated cases, and exhibits low morbidity and high lethality. Although previous studies elucidated crucial aspects involved in the pathogenesis of the disease, there is a paucity of information regarding the molecular events contributing to infection and replication of BoHV-5. The objective of the present study was to determine the in vitro gene expression pattern of BoHV-5 (e.g., alpha, beta, and gamma genes) and host cells genes (GAPDH and 18S) over time utilizing different quantities of inoculated virus. Three BoHV-5 genes (bICP0, UL9, US4) and one structural bovine cell gene had their expression accessed by real-time PCR. While the expression of BoHV-5 genes increased during the course of infection, GAPDH gene expression decreased in the host cells, evidencing the effect of viral infection on the expression of bovine cell genes. The 18S ribosomal RNA (rRNA) gene was constitutively expressed throughout BoHV-5 infection. Our data clearly demonstrates that GAPDH gene should not be used as a reference gene in studies of BoHV-5 infection because it was influenced by viral infection. However, 18S rRNA was constitutively expressed and, therefore, is recommended for normalization of BoHV-5 infection studies in bovine cells. The expression of viral genes transcripts was not altered by increasing number of viral particles added to the culture. All viral genes included here demonstrated the same expression pattern over time and there was no difference in the expression of viral genes among the various time points. Our data show important differences comparing to classical studies regarding herpesvirus alpha, beta, and gamma genes expression. More research is necessary to improve our understanding about the BoHV-5 biology during infection. Studies employing next-generation sequencing (i.e., RNA-seq), using both in vitro and in vivo models, would be the next logical step to grasp the virus and host cell's transcriptome changes over the course of infection.(AU)

Herpesvirus bovino 5 é um alfaherpesvírus causador de meningoencefalite não supurativa em bovinos. Esta doença possui ocorrência natural em surtos ou casos isolados, associadas a baixa morbidade e alta letalidade. Embora estudos anteriores tenham elucidado aspectos relacionados a patogenia da doença, há uma lacuna de conhecimento relacionado aos eventos moleculares que contribuem para a infecção e replicação do BoHV-5. O objetivo do presente estudo foi determinar a expressão gênica in vitro de genes virais (i.e., alfa, beta e gama) e das células hospedeiras (GAPDH e 18S) durante a infecção considerando diferentes momentos de infecção e quantidade de vírus utilizado. Três genes do BoHV-5 (bICP0, UL9, US4), um gene estrutural (GAPDH) e um gene constitutivo (18S) da célula bovina tiveram suas expressões avaliadas por PCR quantitativa (qPCR). Enquanto os genes virais tiveram sua expressão aumentada ao longo do tempo de infecção, o gene hospedeiro teve sua expressão diminuída, demonstrando a ação do vírus na expressão gênica de células bovinas in vitro. O gene constitutivo 18S teve sua expressão mantida durante todos os momentos do experimento. Nossos resultados claramente demonstraram que o GAPDH não deve ser usado como gene de referência em estudos com infecção por BoHV-5 pois é influenciado pela infecção viral. Entretanto, o 18S rRNA foi constitutivamente expresso e pode ser recomendado para normalização em células bovinas infectadas pelo vírus. A expressão de mRNA viral não foi alterada pela quantidade de vírus usada. Todos os genes virais demonstraram o mesmo padrão de expressão ao longo do tempo de infecção. Nossos resultados trazem importantes diferenças comparando aos estudos clássicos que avaliaram a expressão de genes alfa, beta e gama. Mais estudos são necessários para aumentar o conhecimento da biologia molecular do BoHV-5. Estudo utilizando sequenciamento de última geração (i.e., RNA-seq), usando modelos in vitro e in vivo, aparentam ser o próximo passo lógico para acessar as alterações do transcriptoma do hospedeiro e viral ao longo do curso da infecção.(AU)

Potencial evocado visual em cães e ovinos / Visual evoked potential in dogs and sheep

O potencial evocado visual (PEV) é técnica eletrodiagnóstica que permite avaliação das vias visuais. O PEV de 20 cães e 20 ovinos adultos, de ambos os sexos, foram obtidos para estudo normativo. Foram utilizados eletrodos de agulha monopolar posicionados em O1 e O2 (ativos), em Fpz (referência comum) e em Cz (terra). O estímulo foi na forma de flash a 1Hz. Dezessete cães e 17 ovinos foram incluídos no estudo, pois apresentaram potenciais auditivos com boa qualidade técnica. Os resultados da avaliação dos dois olhos foram agrupados, totalizando 34 exames em cada espécie. O achado mais consistente em todos os exames foi uma deflexão eletropositiva, com latência média de 55,4ms em cães (P55) e 63,75ms em ovinos (P63). Outras duas ondas eletronegativas também foram identificadas: N31 e N75 em cães; e N42 e N86 em ovinos. A metodologia utilizada neste estudo permitiu obtenção de potenciais visuais com pequena variabilidade, sendo útil para avaliação de animais com suspeita de alteração nas vias visuais centrais.(AU)

The visual evoked potential (VEP) is an electro-diagnostic technique that allows assessment of visual pathways. The VEP from 20 adult dogs and 20 adult sheep of both gender was obtained for normative study. Monopolar electrode needles were placed in O1 and O2 (active), Fpz (common reference) and Cz (ground). The stimuli were flash at 1Hz. Seventeen dogs and 17 sheep were included in the study because they had auditory potentials with good technical quality. The results from both eyes were grouped, totaling 34 results in each species. The most consistent result in all tests was an electropositive deflection, with a mean latency 55.4ms in dogs (P55) and 63.75ms in sheep (P63). Two negative deflections were also identified: N31 and N75 in dogs, and N42 and N86 in sheep. The methodology used in this study allowed to obtain potential similar to those described in other studies, with little variability, and is useful for evaluation of animals with suspected changes in the central visual pathways.(AU)

Brainstem auditory evoked potentials in horses / Potencial evocado auditivo de tronco encefálico em equinos

ABSTRACT: The brainstem auditory evoked potential (BAEP) evaluates the integrity of the auditory pathways to the brainstem. The aim of this study was to evoke BAEPs in 21 clinically normal horses. The animals were sedated with detomidine hydrochloride (0.013mg.kg-1 BW). Earphones were inserted and rarefaction clicks at 90 dB and noise masking at 40 dB were used. After performing the test, the latencies of waves (I, II, III, IV, and V) and interpeaks(I-III, III-V, and I-V) were identified. The mean latencies of the waves were as follows: wave I, 2.4 ms; wave II, 2.24 ms; wave III, 3.61ms; wave IV, 4.61ms; and wave V, 5.49ms. The mean latencies of the interpeaks were as follows: I-III, 1.37ms; III-V, 1.88ms; and I-V, 3.26ms. This is the first study using BAEPs in horses in Brazil, and the observed latencies will be used as normative data for the interpretation of tests performed on horses with changes related to auditory system or neurologic abnormalities.

RESUMO: O Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefálico (BAEP-Brainstem Auditory Evoked Potential) avalia a integridade das vias auditivas até o tronco encefálico. O objetivo da pesquisa foi padronizar o uso do BAEP em 21 equinos, sem aparente anormalidade auditiva. Os animais foram sedados com cloridrato de detomidina (0,013mg.kg-1 de PV). Foram utilizados fones de inserção,cliques de rarefação a 90 dB e um ruído de mascaramento de 40 dB. Foram identificadas as latências das ondas I, II, III, IV e V e dos interpicos I-III, III-V e I-V. As médias das latências das ondas foram: onda I 2,24ms; onda II 2,74ms; onda III 3,61ms; onda IV 4,61ms; e onda V 5,49ms. As médias das latências dos interpicos foram: I-III 1,37ms; III-V 1,88ms; e I-V 3,26ms. Este é o primeiro estudo utilizando o BAEP em equinos no Brasil e as latências observadas serão utilizadas como dados normativos para interpretação de exames de cavalos com anormalidades auditivas ou neurológicas.

Prevalência da mutação causadora da paralisia periódica hipercalêmica em equinos da raça Quarto de Milha no Brasil / Prevalence of the hypercalemic periodic paralysis mutation in Quarter Horses in Brazil

A paralisia periódica hipercalêmica (HYPP) é uma das principais enfermidades genéticas de caráter dominante que acometem cavalos da raça Quarto de milha (QM). A HYPP é causada por uma mutação pontual no gene SCN4A e, apesar de estar presente nos cavalos QM no Brasil, dados sobre a prevalência da HYPP são escassos. O objetivo deste trabalho foi verificar a prevalência da mutação responsável pela HYPP em cavalos QM, utilizados nas modalidades esportivas de rédeas (n=160), apartação (n=160), tambor e baliza (n=160), corrida (n=160) e conformação (n=101). Foram utilizados DNA sanguíneo dos 741 equinos; o teste genético para enfermidade foi padronizado e as amostras sequenciadas para identificação da mutação no gene alvo. A prevalência de HYPP na população amostrada foi de 4,2%, sendo que somente na linhagem de conformação foram identificados animais positivos (30,7%). Medidas de controle mais efetivas devem ser adotadas para diminuir a prevalência da HYPP.

Hyperkalemic Periodic Paralysis (HYPP) is one of the major dominant genetic diseases which affect Quarter horses (QH). The HYPP is caused by a point mutation in the SCN4A gene and despite the presence of HYPP in Brazilian QH, limited data on the disease prevalence are available. The aim of this study was to investigate the HYPP mutation in QH belonging to reining (n=160), cutting (n=160), barrel racing (n=160), racing (n=160) and halter (n=101) competitive disciplines. Blood DNA from 741 horses were used. Genetic tests were standardized and samples were sequenced to identify the mutation on the target gene. The prevalence of HYPP on the sampled population was 4.2% and the positive animals (30.7%) were only identified in the halter lineage. More effective actions on HYPP control should be done to reduce the disease prevalence. .

Brainstem auditory-evoked potential in Boxer dogs / Potencial evocado auditivo de tronco encefálico em cães da raça Boxer

Brainstem auditory-evoked potential (BAEP) has been widely used for different purposes in veterinary practice and is commonly used to identify inherited deafness and presbycusis. In this study, 43 Boxer dogs were evaluated using the BAEP. Deafness was diagnosed in 3 dogs (2 bilateral and 1 unilateral) allowing the remaining 40 Boxers to be included for normative data analysis including an evaluation on the influence of age on the BAEP. The animals were divided into 2 groups of 20 Boxers each based on age. The mean age was 4.54 years (range, 1-8) in group I, and 9.83 years (range, 8.5-12) in group II. The mean latency for I, III, and V waves were 1.14 (±0.07), 2.64 (±0.11), and 3.48 (±0.10) ms in group I, and 1.20 (±0.12), 2.73 (±0.15), and 3.58 (±0.22) ms in group II, respectively. The mean inter-peak latencies for the I-III, III-V and I-V intervals were 1.50 (±0.15), 0.84 (±0.15), and 2.34 (±0.11) ms in group I, and 1.53 (±0.16), 0.85 (±0.15), and 2.38 (±0.19) ms in group II, respectively. Latencies of waves I and III were significant different between group I and II. For the I-III, III-V and I-V intervals, no significant differences were observed between the 2 groups. As far as we know, this is the first normative study of BAEP obtained from Boxer dogs.

O potencial evocado auditivo de tronco encefálico (PEATE) tem sido amplamente utilizado com diferentes finalidades na prática veterinária e é comumente usado para identificar a surdez hereditária e a presbiacusia. No presente estudo, 43 cães da raça Boxer foram pelo teste PEATE. Foi diagnosticada surdez em 3 cães (2 bilaterais e 1 unilateral), e 40 Boxers foram usados no estudo normativo incluindo avaliação da influência da idade no PEATE. Os animais foram divididos de acordo com a idade em 2 grupos de 20 Boxers cada. A idade media foi 4,54 anos (variação de 1-8) no grupo I e 9,83 anos (variação de 8,5-12) no grupo II. A latência media das ondas I, III e V foram: 1,14 (±0,07); 2,64 (±0,11) e 3,48 (±0,10) ms no grupo I; e 1,20 (±0,12); 2,73 (±0,15) e 3,58 (±0,22) ms no grupo II, respectivamente. A latência media para os intervalos I-III, III-V e I-V foram 1,50 (±0,15); 0,84 (±0,15) e 2,34 (±0,11) ms no grupo I; e 1,53 (±0,16); 0,85 (±0,15) e 2,38 (±0,19) ms no grupo II, respectivamente. As latências das ondas I e III foram estatisticamente diferentes entre os grupos I e II. Não foram observadas diferenças estatísticas entre os dois grupos para os intervalos I-III, III-V e I-V. De acordo com a revisão realizada, este é o primeiro estudo normativo de BAEP realizado em cães da raça Boxer.

A sedação sobre os potenciais evocados auditivos em cães / The sedation on the auditory brainstem responses in dogs

O potencial evocado auditivo de tronco encefálico (Brainstem Auditory Evoked Potential - BAEP) avalia a atividade elétrica do sistema auditivo, desde a cóclea até o tronco encefálico, permitindo diagnóstico de surdez em cães. Como alguns animais não permitem a obtenção do BAEP sem contenção química, o objetivo deste trabalho foi analisar a influência da sedação com morfina e acepromazinano BAEP de 16 cães com audição normal. Os potenciais foram obtidos antes e durante a sedação com administração intramuscular de morfina (0,5mgkg-1) e acepromazina (0,05mgkg-1). O protocolo de sedação utilizado permitiu contenção efetiva e segurança dos animais. A sedação causou prolongamento nas latências das ondas II, III e intervalos I-III e I-V, mas não dificultou as suas identificações. O uso deste protocolo de sedação não interferiu com a interpretação do potencial evocado e pode ser útil em cães. Pelo que se pode observar na literatura compilada, este é o primeiro estudo avaliando a influência da sedação no BAEP em cães no Brasil.

Brainstem auditory evoked potential (BAEP) reflects the electrical activity along the auditory pathway, from the cochlea to the brainstem, and contributes for the diagnosis of deafness in dogs. BAEP recording may require chemical restraint in some cases, so this study was designed to analyze the impact of sedation with morphine and acepromazine on the BAEP recordings of 16 dogs with normal hearing. BAEPs were recorded before and during sedation with a combination of morphine (0.5mgkg-1) and acepromazine (0.05mgkg-1) given intramuscularly. The protocol employed allowed safe and effective animal restraint. Sedation increased the latency of waves II and III and intervals I-III and I-V but did not interfere with wave identification. and showed to be safe in the dogs tested. Based on the current literature this is the first study which assessed the impact of sedation on BAEPs in dogs in Brazil.

Potencial evocado auditivo para diagnóstico de surdez bilateral em dois cães / Auditory evoked potential to diagnose of bilateral deafness in two dogs

O potencial auditivo evocado de tronco encefálico é um método eletrodiagnóstico não invasivo que permite avaliação objetiva do estado auditivo, da orelha média ao tronco encefálico, captando a atividade elétrica do sistema auditivo, gerada a partir de um estímulo sonoro específico. O uso desse teste não é difundido em animais no Brasil. Sendo assim, o objetivo do presente trabalho é relatar o diagnóstico de surdez bilateral em dois cães sem raça definida, com a utilização do potencial evocado auditivo de tronco encefálico.

The brainstem auditory evoked potential is a noninvasive electrodiagnostic test allowing an objective assessment of the hearing status, by capturing the electrical activity of the auditory system, from the middle ear to the brainstem, generated after a specific sound stimulus is performed. The use of this test is not common in animals in Brazil. Therefore, the objective of this study is to report the diagnosis of bilateral deafness in two mongrel dogs, using the brainstem auditory evoked potential.

Surto de abscesso mandibular por Pseudomonas aeruginosa em ovinos / Outbreak of mandibular abscess by Pseudomonas aeruginosa in sheep

Descreve-se um surto de abscesso mandibular em ovelhas da raça Bergamácia no município de Botucatu, estado de São Paulo. Do rebanho de 120 animais, 35 apresentaram aumento de volume mandibular com a presença de nódulos únicos, de consistência pétrea, de diferentes tamanhos, fistulados ou não e sem indicativos de inflamação dos tecidos moles adjacentes. Os animais eram criados em pasto de Panicum maximum cv. Tanzânia com água e sal mineral ad libitum e everminados, via oral, com pistolas dosificadoras. O material para diagnóstico microbiológico e antibiograma foi coletado de cinco animais acometidos, por punção e aspiração dos nódulos. Dos 35 animais acometidos, 19 foram submetidos ao exame radiográfico, um ao exame tomográfico e outro à biópsia óssea da região submandibular. O único ovino que morreu, encontrava-se em estado de caquexia provavelmente devido à localização do aumento de volume que afetou a implantação dos dentes molares daquela região impedindo a apreensão e mastigação adequadas levando a perda da condição corporal e morte. Ao exame necroscópico, observaram-se áreas de necrose caseosa na mandíbula direita de onde isolou-se Pseudomonas aeruginosa. O tratamento utilizado foi baseado na aplicação de iodeto de sódio a 10 por cento por via intramuscular e antibioticoterapia segundo antibiograma com enrofloxacina por via intramuscular, porém com pouca eficácia. Diante do quadro clínico, dos dados de anamnese, da localização das lesões no tecido ósseo mandibular, do resultado do cultivo microbiológico, das alterações radiográficas e tomográficas foi feito o diagnóstico de abscesso mandibular causado por Pseudomonas aeruginosa.

We describe an outbreak of mandibular abscess in Bergamácia sheep from the municipality of Botucatu, São Paulo, Brazil. In a herd of 120 sheep, 35 showed an increase of the mandibular volume with presence of a single nodule of stony consistency and different sizes, often fistulated but with no signs of inflammation in the surrounding soft tissues. The sheep were raised on a Panicum maximum cv. Tanzania pasture, with water and mineral salt ad libitum, and were treated orally against parasites with drenching pistols. Material for microbiological diagnosis and antibiogram was collected from the nodules of five affected sheep, through puncture and aspiration. From 35 affected sheep, 19 were submitted to radiographic examination, one was submitted to computer tomography and another to bone biopsy of the submandibular region. The only sheep that died was in a state of cachexia, probably due to the location of the volume increase which affected the molar hindering apprehension and appropriate chewing. Necropsy revealed areas of caseous necrosis in the jaw, from where Pseudomonas aeruginosa was isolated. The sheep were treated with intramuscular application of 10 percent sodium iodide and the antobiotgic enrofloxacin, but with little efficacy. Based on the clinical data from medical records, the location of lesions in the jaw bone, the result of microbiological culture, radiographic and computer tomography, the diagnosis of mandibular abscesses due to Pseudomonas aeruginosa infection was made.

Hematological and cerebrospinal fluid changes in cattle naturally and experimentally infected with the bovine herpesvirus 5

Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) meningoencephalitis is one of the main causes of mortality by encephalopathy in Brazilian cattle herds. However, the neurological signs observed are common to several encephalopathies and do not contribute decisively to a diagnosis. In order to verify hematological and cerebrospinal fluid (CSF) changes, blood and CSF samples from naturally and experimentally infected bovines were evaluated. In natural cases (n=17), the samples were collected only once, and in experimental cases (n=7), the samples were sequentially obtained throughout disease progression. While routine methods were used to examine the samples, BoHV-5 infection was confirmed by a PCR assay. Blood analyses did not reveal any consistent hematological alterations and the leukogram results occasionally showed increases in leukocyte and segmented neutrophil. Hyperfibrinogenemia was noted in all experimentally infected calves and in half of the natural cases. Pleocytosis with mononuclear cells was a remarkable finding in CSF collected from both groups of animals and was present even in experimentally infected calves that remained asymptomatic. Therefore, CSF evaluation can be used as an auxiliary method in ante-mortem BoHV-5 diagnosis.

A meningoencefalite determinada pelo herpesvírus bovino 5 (BoHV-5) é considerada uma das principais causas de mortalidade por encefalopatia em bovinos no Brasil. O diagnóstico clínico da infecção é difícil de ser realizado pois os sinais neurológicos ocasionados pela infecção com o BoHV-5 são comuns aos observados em encefalopatias bovinas de diferentes etiologias. Com o objetivo de determinar as alterações hematológicas e do líquido cefalorraquidiano, foram avaliadas amostras de sangue total e líquor colhidas de animais infectados tanto naturalmente quanto experimentalmente. Nos casos naturais da doença (n=17), as amostras foram coletadas apenas uma vez. Nos casos de infecção experimental (n=7), as amostras foram obtidas sequencialmente durante a evolução clínica da doença. Enquanto na análise das amostras clínicas foram empregadas metodologias rotineiras, a infecção pelo BoHV-5 foi confirmada em todos os animais incluídos nesse estudo por meio da técnica de PCR. As análises hematológicas não revelaram alterações consistentes e os resultados obtidos a partir do leucograma mostraram aumento ocasional de leucócitos e neutrófilos segmentados. A hiperfibrinogenemia pôde ser observada em todos os bezerros infectados experimentalmente e em metade dos casos naturais da doença. Diferentemente, a pleiocitose com predomínio de células mononucleares foi considerada um achado marcante nas amostras de líquor coletadas em ambos os grupos de animais, encontrando-se presente até mesmo nos bezerros infectados experimentalmente que permaneceram assintomáticos. Os resultados do presente estudo, obtidos tanto em condições de infecções naturais quanto experimentais, demonstraram que a avaliação do líquor cefalorraquidiano pode ser utilizada como método auxiliar para o diagnóstico ante-mortem da infecção pelo BoHV-5.

Doença vestibular periférica decorrente de osteoartropatia temporoioídea em um eqüino / Peripheral vestibular disease associated with temporohyoid osteoarthropathy in a horse

Um eqüino com 22 anos de idade apresentou síndrome vestibular periférica associada à paralisia de nervo facial esquerdo devido à osteoartropatia temporoioídea. O exame endoscópico das bolsas guturais mostrou alteraçäo de contorno da bula timpânica esquerda e aumento de volume da extremidade proximal do osso estiloióide do mesmo lado.

Concentração de imunoglobulinas G e M no soro sanguíneo de bezerros da raça Holandesa até os 90 dias de idade / Serum immunoglobulins G and M concentration in the serum of holstein calves until 90 days old

Avaliou-se os níveis de imunoglobulinas G e M no soro sangüíneo de 32 bezerros da raça Holandesa desde o nascimento até os 90 dias de vida, levando-se em consideração a forma de ingestão (mamada natural na mãe ou em mamadeira) e a quantidade de colostro administrado. Os animais foram distribuídos em quatro grupos. O grupo 1 recebeu quatro litros de colostro fornecido na mamadeira; o grupo 2 recebeu dois litros de colostro também fornecido através da mamadeira; o grupo 3 ingeriu colostro diretamente nas mães e o grupo 4 foi tratado exclusivamente com leite administrado através de mamadeira. Os resultados obtidos para as concentrações de IgG sérica não apresentaram diferenças estatísticas significativas quanto a forma de fornecimento do colostro (mamada na mãe ou em mamadeira), porém os níveis dessa imunoglobulina sempre foram mais elevados nos animais que mamaram nas mães, seguidos pelos que receberam quatro litros de colostro. Nos animais que não mamaram colostro, a produção de imunoglobulinas G e M é mais precoce, respectivamente, a partir de 30 e 15 dias de vida.

This study evaluated the G and M concentrations in serum of 32 calves until 90 days old, considering the way (direct suckling from mother or by bottle) and the volume of ingested colostrum. The calves were divided into 4 groups. Group 1: four liters of colostrum fed by bottle; Group 2: two liters of colostrum fed by bottle; Group 3: direct suckling from mother and and Group 4: two liters of milk by bottle. Serum IgG concentrations obtained in this study had no significant difference in the way of colostrum feeding (direct suckling from mother or by bottle), but their levels were higher in the former way of administration of colostrum, followed by those which received 4 liters of colostrum. Those animals which were not fed with colostrum presented IgG and IgM levels earlier, from 30 and 15 days old, respectively.